Uudised

Javascript on praegu teie brauseris keelatud.Mõned selle veebisaidi funktsioonid ei tööta, kui JavaScript on keelatud.
Registreeruge oma konkreetsete andmete ja huvipakkuva ravimiga ning me ühendame teie esitatud teabe meie ulatuslikus andmebaasis olevate artiklitega ja saadame teile kohe PDF-koopia.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, Suzhou ülikooli esimese sidushaigla nakkushaiguste osakond, Suzhou linn, Jiangsu provints, 215000 Tel.seedesüsteemi kasvajad, mille 5-aastane üldine elulemus on 14,1%.Paljud HCC-ga patsiendid diagnoositakse kaugelearenenud staadiumis, seega on HCC-st põhjustatud suremuse vähendamiseks oluline varajane sõeluuring.Lisaks tavaliselt kasutatavatele tuvastamisindikaatoritele, nagu seerumi alfa-fetoproteiin (AFP), läätse lektiini suhtes reageeriv alfa-fetoproteiin (AFP-L3) ja ebanormaalne protrombiin (K-vitamiini vaegusest põhjustatud valk II, PIVKA-II), vedeliku biopsia tehnikad On näidatud, et sellel on HCC tuvastamisel diagnostiline väärtus.Võrreldes invasiivsete protseduuridega saab vedeliku biopsia abil tuvastada ringlevaid pahaloomulisi metaboliite.Vedeliku biopsia tehnikad tuvastavad ringlevad kasvajarakud, ringleva kasvaja DNA, ringleva RNA ja eksosoomid ning neid kasutatakse HCC varaseks sõeluuringuks, diagnoosimiseks ja prognostiliseks hindamiseks.Selles artiklis vaadeldakse molekulaarbioloogiat ja erinevate vedelikubiopsia tehnikate rakendamist, et eraldada paljutõotavad biomarkerid, mis võivad olla elujõulised võimalused HCC varajaseks hindamiseks, et parandada kõrge riskiga HCC rühmade varajast sõeluuringut.Märksõnad: vedeliku biopsia tehnika, hepatotsellulaarne kartsinoom, kõrge riskiga rühm.
Hepatotsellulaarne kartsinoom (HCC) on tavaline pahaloomuline seedetrakti kasvaja, mis on nii meeste kui naiste pahaloomuliste kasvajate uute juhtude hulgas kuuendal kohal.1 Kogu maailmas on maksavähk kopsu- ja jämesoolevähi järel kolmas vähisurma põhjus, moodustades 8,3% vähiga seotud surmajuhtumitest kõigist pahaloomulistest kasvajatest.1 HCC prognoos on tihedalt seotud diagnoosimise staadiumiga.HCC halva ellujäämise peamised põhjused on intrahepaatilised metastaasid, portaalveeni kasvaja trombid ja resektsiooni välistavad kauged metastaasid ning paljud neist omadustest on patsientidel diagnoosimise ajal juba olemas.
Diagnostika- ja ravijuhiste põhjal on HCC tekke peamisteks riskiteguriteks maksatsirroos, krooniline B-hepatiidi viiruse (HBV) või C-hepatiidi viiruse (HCV) infektsioon, alkohoolne rasvmaksahaigus ja mittealkohoolne rasvmaksahaigus (NAFLD). ).2 Lisaks on HCC riskifaktoriteks aflatoksiiniga saastunud toidu tarbimine, skistosomiaas, muud tsirroosi põhjused, maksavähk, diabeet, rasvumine, suitsetamine ja ravimitest põhjustatud maksakahjustus.35- ja 45-aastased kõrge riskiga rühmad peaksid regulaarselt käima tervisekontrollis.Varajane sõeluuring on oluline varajane ravistrateegia HCC-ga patsientide üldise elulemuse parandamiseks.
HCC3,4 varajaseks skriinimiseks soovitatakse selliseid biomarkereid nagu AFP, AFP-L3 ja PIVKA-II.Vedelate biopsia meetodid on näidanud paljutõotavaid tulemusi varajasel diagnoosimisel ja ravi hindamisel.5,6 Märkimisväärseid edusamme on tehtud HCC vedeliku biopsias, millel võib olla suurem tundlikkus ja spetsiifilisus kui tavaliselt kasutatavatel seerumimarkeritel, nagu AFP (tabel 1).
AFP on HCC-s laialdaselt kasutatav biomarker ja praegu on see kõige üksikasjalikum biomarker, mida kasutatakse laialdaselt haiguse varajaseks sõeluuringuks, diagnoosimiseks ja hindamiseks.Püsivalt kõrgenenud AFP taset peetakse HCC progresseerumise riskiteguriks.7,8 Väikese hepatotsellulaarse kartsinoomi (sHCC) avastamismäär suureneb ultraheli ja kompuutertomograafia arenguga ning on leitud, et AFP on kliinilises praktikas hHCC tuvastamise suhtes eriti tundetu.Retrospektiivse mitmekeskuselise uuringu9 kohaselt leiti AFP positiivne 46% (616/1338) HCC juhtudest ja 23,4% (150/641) sHCC juhtudest.Lisaks on kroonilise maksahaiguse ja tsirroosiga patsientidel AFP tase kõrgenenud.10 Seega on AFP-l sHCC suhtes piiratud sõelumisefekt.11 Vastavalt Aasia ja Vaikse ookeani piirkonna hepatotsellulaarse kartsinoomi kliinilise praktika juhistele ei ole AFP kasutamine soovitatav.12 Kliinilised tõendid näitavad, et PIVKA-II on HCC ravis parem kui AFP ning PIVKA-II ja AFP kombinatsioon kõrgem diagnostiline väärtus HCC-s.13 Võrreldes koebiopsiaga tuvastab vedelikubiopsia peamiselt kasvajaga seotud metaboliite kehavedelikest (veri, sülg, pleuravedelik, tserebrospinaalvedelik või uriin) ja on kudedesse vähem invasiivne.14 Lisaks võivad vedelad biopsiad kajastada pahaloomulisi tunnuseid, mida primaarses kasvajakoes ei esine.15 Vedelaid biopsiaid ei testita veel kliinilises praktikas kõikide kasvajatüüpide puhul, kuid nende diagnostiline potentsiaal vähi puhul köidab onkoloogide tähelepanu.16 Vedelikubiopsia abil saab tuvastada tsirkuleerivaid kasvajarakke (CTC), ringlevat kasvaja DNA-d (cDNA), ringlevat vaba RNA-d (ecRNA) ja eksosoome.Selles artiklis käsitleme erinevate vedelikubiopsia tehnikate omadusi, rolli ja rakendamist kõrge riskiga HCC rühmade varases sõeluuringus.
Ekstratsellulaarset DNA-d (cfDNA) tervete inimeste vereproovides kirjeldasid esmakordselt 1948. aastal Mandel et al.17 cfDNA on umbes 160–180 aluspaari pikkune rakuvaba DNA fragment, mis pärineb peamiselt lümfotsüütidest ja müeloidrakkudest.ctDNA on kasvajarakkude poolt perifeersesse verre vabanev spetsiifiline mutantne DNA fragment, mis esindab kasvajarakkude genoomset informatsiooni pärast teatud patofüsioloogilisi protsesse, sealhulgas nekroosi, apoptoosi ja eritumist.CtDNA osakaal kogu cfDNA-s varieerub suuresti sõltuvalt kasvaja tüübist ja teatatakse, et cDNA fragmendid on tavaliselt alla 167 aluspaari pikkused.18 Underhilli uuring näitas, et cfDNA fragmendid on üldiselt lühemad kui tavaline cfDNA.19 Võrreldes tervete inimestega on vähihaigete veres olevate cfDNA fragmentide kogupikkus lühem, seega saab cfDNA-d kasutada varajase kasvaja sõeluuringu indikaatorina.Teatud cfDNA fragmentide pikkuste alamhulkade rikastamine võib parandada mittemetastaatilise tahke kasvajaga seotud cDNA tuvastamist.Uuringud on näidanud, et ctDNA-d leidub enam kui 75% kaugelearenenud kõhunäärme-, käärsoole-, põie-, seedetrakti-, maksa-, munasarja-, rinna-, melanoomi- ning pea- ja kaelavähi korral.20,21 Kuid ctDNA kogus veres sõltub kasvaja asukohast.22 Bettegoudi uuringus leiti, et kolorektaal-, rinna-, maksa-, kopsu- ja eesnäärmevähiga patsientidel on cDNA tase veres kõrgem kui teiste vähivormide puhul.Seevastu suuvähi, kõhunäärmevähi, maovähi ja glioomiga patsientidel oli cDNA kontsentratsioon veres madalam.kakskümmend üks
Kuna ctDNA sisaldab samu geneetilisi mutatsioone kui primaarsed kasvajarakud, saab cDNA-d kasutada heterogeensete kasvajaspetsiifiliste mutatsioonide ja epigeneetiliste muutuste, sealhulgas metüülimise, hüdroksümetüülimise, üksikute nukleotiidide variatsioonide ja koopiate arvu variatsioonide tuvastamiseks.kakskümmend kolm
DNA metüülimine on üks levinumaid epigeneetilisi muutusi, mille tulemuseks on geenide represseerimine.Võrreldes normaalsete rakkudega on kasvajaraku genoomi üldises metüülimise tasemes erinevusi, eriti kasvaja supressorgeenide metüülimises, mida saab tuvastada varajases staadiumis, mis viitab sellele, et muutused DNA metüülimises võivad olla varajases staadiumis. tuumorigeneesi tuvastamine.HCC-ga seotud kasvaja supressorgeene saab inaktiveerida promootori metüülimisega, stimuleerides seeläbi tuumorigeneesi.24 DNA metüülimine on oma koespetsiifilisuse, tuvastatavuse ja vanusest sõltumatuse tõttu ideaalne marker kasvajate varajaseks diagnoosimiseks.Lisaks on DNA metüülimine somaatiliste mutatsioonidega võrreldes tavalisem, kuna sihtmärkgenoomi igas piirkonnas on rohkem sihtpiirkondi ja mitu muudetud CpG saiti.25 Lisaks mitmetele CpG saitidele on DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 ja RGS10.26 puhul tuvastatud suur hulk sõltumatuid hüpermetüleeritud lookusi ctDNA-s.1098 HCC patsiendi ja 835 terve kontrolli cfDNA proovide võrdlemisel leiti, et HCC-ga seotud geenid on tugevas korrelatsioonis vastavate plasma cDNA metüülimise signatuuridega.25 Laboratoorsete analüüside põhjal töötati välja ennustusmudel, mis sisaldas 10 metüülimismarkerit, mille tundlikkus ja spetsiifilisus oli vastavalt 85,7% ja 94,3%, ning need markerid olid tugevas korrelatsioonis kasvaja massi, kasvaja staadiumi ja ravivastusega.Need tulemused näitavad, et cDNA metüülimismarkerite kasutamine on HCC diagnoosimisel, jälgimisel ja prognoosimisel paljutõotav.Metüleerimismudelis, mis koosnes kolmest ebanormaalselt metüleeritud geenist (APC, COX2, RASSF1A) ja ühest miRNA-st (miR203), mille on esitanud Lu jt27, oli mudeli 27 tundlikkus ja spetsiifilisus HBV-ga seotud HCC diagnoosimisel võrreldavad.80%.Lisaks võis mudel tuvastada 75% diagnoosimata HCC patsientidest, kelle AFP tase oli 20 ng/ml.Ras-seotud domeeniperekonna 1A valgu (RASSF1A) geen on inimese genoomi peamine korduv DNA järjestus.Araujo jt.järeldas, et RASSF1A promootori hüpermetüleerimine võib olla väärtuslik biomarker HCC varajaseks sõelumiseks ja potentsiaalne molekulaarne sihtmärk epigeneetilises ravis.28 Ühes uuringus leiti seerumi RASSF1A promootori hüpermetüleerimine 73,3% HCC-ga patsientidest.29 Long interspersed nukleotiidelement 1 (LINE-1) on teine ​​väga aktiivne retrotranspositsiooni vahendaja.LINE-1 hüpometüleerimine leiti 66, 7% HCC seerumiproovide DNA-st ja see oli seotud varajase kordumise ja halva elulemusega pärast radikaalset resektsiooni.29 Hüpermetüleerimine on tavaline geneetiline protsess, mis mängib maksatsirroosi ja HCC tekkes ainulaadset rolli.30 Seevastu hüdroksümetüülimine on demetüleerimisprotsess, mis kutsub esile geenide taasaktiveerimise ja ekspressiooni ning 5-hüdroksümetüültsütosiini (5-hmC) produkti tuvastamist selles protsessis saab kasutada kasvaja tuvastamiseks.cDNA metüülimine ja hüdroksümetüülimine on seotud tuumorigeneesiga ja võib kaasa aidata HCC varasele skriinimisele.2554 subjektiga läbi viidud uuringus leiti cfDNA proovidest 31 genoomi hõlmavat 5-hmC-d ja 5-hmC järjestuste võrdlemisel HCC-ga patsientidel ja kõrge riskiga rühmadel, näiteks krooniliste haigustega inimestel, tuvastati 32 geeni.Maksahaiguste diagnostilised mudelid.ja tsirroos.See mudel oli HCC eristamisel mittekasvajalisest koest parem kui AFP.
Mutatsioonid kodeerivates piirkondades võivad põhjustada transkriptsioonihäireid, mis võivad põhjustada muutusi valgu järjestustes ja lõpuks vähki.Ühe nukleotiidi variandid on nende suure koe usaldusväärsuse ning kasvaja ja koespetsiifilisuse tõttu olulised genoomilised markerid kasvaja varase sõeluuringu jaoks.Arvukad HCC-ga seotud uuringud, mis kasutavad vähi eksoomi ja kogu genoomi järjestamiseks järgmise põlvkonna sekveneerimist (NGS), on tuvastanud tavalised muteerunud rakugeenid, nagu TP53 ja CTNNB1, aga ka mitmed, sealhulgas ARID1A, MLL, IRF2.Uued geenid ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 ja JAK1 näitavad mõõdukat mutatsioonimäära. Mutantsete geenifunktsioonide analüüs viitab sellele, et muutused kromatiini remodelleerumises, Wnt/β-kateniini ja JAK/STAT signaaliülekandes, P53-rakutsükli rajas, epigeneetilistes modifikaatorites, oksüdatiivse stressi radades, PI3K/AKT/MTOR rajas ja RAS/RAF/ MAPK kinaasi rada mängib HCC onkogeneesis otsustavat rolli.32,33 Uuringus, milles tuvastati kasvajaga seotud mutatsioonid, leidsid Huang jt, et ctDNA-st sõltuvate kasvajaga seotud mutatsioonide esinemissagedus oli 19,5% ja spetsiifilisus 90%. .34 Lisaks olid patsientidel, kellel esines veresoonte invasioon, suurema tõenäosusega ctDNA mutatsioonid (P=0,041) ja lühem kordumiseta elulemus (P<0,001). Mutantsete geenifunktsioonide analüüs viitab sellele, et muutused kromatiini remodelleerumises, Wnt/β-kateniini ja JAK/STAT signaaliülekandes, P53-rakutsükli rajas, epigeneetilistes modifikaatorites, oksüdatiivse stressi radades, PI3K/AKT/MTOR rajas ja RAS/RAF/ MAPK kinaasi rada mängib HCC onkogeneesis otsustavat rolli.32,33 Uuringus, milles tuvastati kasvajaga seotud mutatsioonid, leidsid Huang jt, et ctDNA-st sõltuvate kasvajaga seotud mutatsioonide esinemissagedus oli 19,5% ja spetsiifilisus 90%. .34 Lisaks olid patsientidel, kellel esines veresoonte invasioon, suurema tõenäosusega ctDNA mutatsioonid (P=0,041) ja lühem kordumiseta elulemus (P<0,001).Mutantsete geenifunktsioonide analüüs viitab sellele, et muutused kromatiini remodelleerumises, Wnt/β-kateniini ja JAK/STAT signaaliülekandes, P53 rakutsükli rajas, epigeneetilistes modifikaatorites, oksüdatiivse stressi radades, PI3K/AKT/MTOR rajas ja RAS/RAF/MAPK kinaasi rajas kriitilist rolli HCC tuumorigeneesis.32,33 Uuringus, milles leiti kasvajaga seotud mutatsioone, leidsid Huang et al.leidis, et ctDNA-st sõltuvate kasvajaga seotud mutatsioonide esinemissagedus oli 19,5% ja spetsiifilisus 90%..34 Кроме того, у пациентов с сосудистой инвазией чаще встречались мутации цДДНК,0жвостна (P=0,041) и босудистой инвазией чаще встречались мутации цДДНК. .34 Lisaks oli veresoonte invasiooniga patsientidel rohkem cDNA mutatsioone (P=0,041) ja lühem haigusvaba elulemus (P<0,001).Mutantsete geenide funktsionaalne analüüs näitas kromatiini remodelleerumist, Wnt/β-kateniini ja JAK/STAT signaaliülekannet, P53 rakutsükli rada, epigeneetilisi modifikaatoreid, oksüdatiivse stressi rada, PI3K/AKT/MTOR rada ja RAS/RAF/MAPK. kinaasi rada mängivad HCC onkogeneesis kriitilist rolli. 32,33 在 一 项 到 肿瘤 肿瘤 相关 相关 突变 研究 中 ， ， huang 等 发现 肿瘤 肿瘤 相关 突变 依赖于 依赖于 依赖于 依赖于 依赖于 依赖于 依赖于 的 的 频率 为 为 为 19,5% ， ， ， ， ， 90% .34 此外 ， ， ， ， 更 更 更 有 有 有 可能 可能 可能 发生 发生 发生 可能 可能 可能 可能 可能 有 有 有 有 有 有 有 有 有 有 有 有 有 有 有突变（P=0,041）和更短的无复发生存期（P<0,001）. 32,33 在 一 项 到 相关 突变 突变 的 的 ， ， Huang 等 发现 相关 突变 突变 突变 依赖于 依赖于 依赖于 依赖于 的 的 为 为 为 为 为 19,5% ， 特异性 为 为 为 为 为 90% .34 此外 经历 血管 血管 侵犯 侵犯 侵犯 侵犯 的 的 突变 突变 突变 （（hind P = 0,041 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更短的无复发生存期（P<0,001）.32,33 Uuringus, milles leiti kasvajaga seotud mutatsioone, leidsid Huang et al.leidis, et kasvajaga seotud mutatsioonid sõltusid 19,5% ulatuses cDNA-st spetsiifilisusega 90%. 34. Lisaks oli vaskulaarse invasiooni läbinud patsientidel suurem tõenäosus cDNA tekkeks.мутация (P = 0,041) и более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). mutatsioon (P=0,041) ja lühem haigusvaba elulemus (P<0,001).Teine levinud HCC juhtgeen on TP53, mille mutatsioonimäär on üle 30%.Uuringud on näidanud, et TP53 mutatsioonide sagedus ctDNA-s veres ja uriinis on vahemikus 5% kuni 60%.35 Johani uuring näitas, et hilise HCC ctDNA mutatsioonispektril on varase HCC-ga sarnane mutatsioonimäär, sealhulgas TERT promootor (51%), TP53 (32%), CTNNB1 (17%), PTEN (8%), mutatsioonid AXIN1 ., ARID2, KMT2D ja TSC2 (mõlemad 6%).36 β-kateniini (CTNNB1) onkogeen mängib Wnt signaalirajas olulist rolli.Transkriptsiooni koaktivaator CTNNB1 võib soodustada geeniekspressiooni, mis võib põhjustada rakkude proliferatsiooni, apoptoosi pärssimist ja angiogeneesi.CTNNB1 võib hepatotsüütide transformatsiooni esilekutsumiseks suhelda ka TERT-ga.33 TERT promootor muteerub sageli mõnes soliidkasvajas.Muutused TERT-is, mis on üks varasemaid geneetilisi muutusi HCC pahaloomulises transformatsioonis, võivad põhjustada telomeraasi taasaktiveerumist tsirrootilistes hepatotsüütides ning soodustada proliferatsiooni ja ennetada vananemist.On teatatud, et 33–37 TERT promootori mutatsioonid esinevad 59–90% proliferatiivsete maksasõlmede ja varajase HCC-ga patsientidest ning need on seotud ellujäämisega.38
Koopiaarvu muutused (CNA) on somaatiliste mutatsioonide oluline alatüüp.Uuringud on näidanud, et CNA laialt levinud ja fokaalne koormus on genoomne signatuur, mis suudab ennustada kasvaja immuunsüsteemi infiltratsiooni ja väljajätmist teatud tüüpi vähi korral.39 Aktiivne infiltratsiooni signaalimine, kõrge tsütolüütiline aktiivsus, raske põletik ja geneetilised markerid, mis on seotud antigeeni esitlemisega HCC-s.Ühe nukleotiidi polümorfismide andmemassiivi analüüs 477 isikul näitas kesknärvisüsteemi vähest koormust.Seevastu kromosomaalselt ebastabiilsetel kasvajatel, millel oli suur ulatuslik CNA koormus, ilmnesid immuunsüsteemi äratõukereaktsiooni tunnused ja neid seostati proliferatsiooni, DNA paranemise ja TP53 düsfunktsiooniga.Xu et al.näitas, et HCC rühmal oli kõrgem CNA skoor kui kroonilise maksahaiguse rühmal.40 Kasutades ühe raku kogu genoomi järjestust, leiti, et CNA-d ilmnevad hepatokartsinogeneesi varajases staadiumis ja jäävad kasvaja progresseerumise ajal suhteliselt stabiilseks.41 Chung et al.leidis, et cfDNA tasemed olid HCC-ga patsientidel märkimisväärselt tõusnud ja cfDNA-s olevad genoomi hõlmavad CNA-d olid sorafeniibiga ravitud HCC-ga patsientidel oluline sõltumatu prognostiline marker.42 Kõrgema CNA-koormusega patsientidel oli suurem tõenäosus haiguse progresseerumiseks ja surmaks kui madalama CNA-koormusega patsientidel.Ollerich et al.leidis, et koopiaarvu ebastabiilsuse indeksit (CNI) saab kasutada vähihaigete cfDNA CNA hindamiseks.Nad märkisid, et kaugelearenenud vähiga patsientidel oli oluliselt kõrgem CNI skoor kui kontrollrühmal, kes hindab patsiendi reaktsiooni süsteemsele keemiaravile ja immunoteraapiale.43 Need tulemused viitavad sellele, et vedelates biopsiaproovides leitud CNA-d võivad olla kaugelearenenud vähiga patsientidel prognostiliste näitajatena.HCC süsteemse ravi taustal.
Praegu saab ctDNA tuvastamiseks kasutatavad meetodid jagada siht- ja mittesihtmeetoditeks.Lühidalt, sihitud meetodid, nagu digitaalne polümeraasi ahelreaktsioon (dPCR), BEAMing digitaalne PCR, amplifikatsiooni refraktaarne mutatsioonisüsteem-PCR, Capp-Seq ja Tam-Seq, on eelnevalt määratletud geenide suhtes väga tundlikud.Sihtmärgivälised meetodid, nagu kogu genoomi järjestamine ja NGS, annavad tervikliku ülevaate kogu genoomsest maastikust.44 Võrreldes sihtpaneelidega suudab kogu genoomi järjestamine tuvastada mitte ainult punktmutatsioone ja insertsioone, vaid ka ümberkorraldusi ja koopiate arvu variatsioone.prognoos ning CTC ja cfDNA on head näitajad, mida saab kasutada HCC dünaamiliseks jälgimiseks.45 Lisaks võib cfDNA analüüs olla kasulikum HCC tuvastamisel.Yan et al.näitas, et cfDNA HCC-ga patsientide plasmas oli oluliselt kõrgem kui maksafibroosiga ja tervete kontrollidega patsientidel.Võrreldes AFP-ga, eeldatakse, et ctDNA on varase HCC parem skriinimismarker.46 Prospektiivses uuringus 47 vedela biopsiaga, milles testiti cfDNA-d ja valku populatsioonipopulatsioonis, osutus need tõhusaks HCC-ga patsientide eristamisel HCC-ta patsientidest.331 ultraheli normaalse ja AFP-negatiivse patsiendi jälgimisel oli cfDNA tundlikkus ja spetsiifilisus HCC diagnoosimisel vastavalt 100% ja 94%, nii et cDNA suutis tuvastada HCC asümptomaatilisel HBsAg seropositiivsetel isikutel.Yeo48 uuringus leiti HCC-ga patsientidel RASSF1A promootori hüpermetüleerimise kõrge sagedus (92,5%).Lisaks Xu et al.lõi diagnostilise mudeli HCC ennustamiseks, kasutades spetsiifiliste metüülimismarkerite paneeli, mille spetsiifilisus ja tundlikkus on vastavalt 90, 5% ja 83, 3%.Paneel võimaldab HCC-ga patsiente eristada teiste maksahaigustega patsientidest, mis on parem kui AFP.Samuti leidsid nad, et normaalsetel kontrollidel, mille test oli positiivne, võib olla HCC riskitegureid, nagu HBV infektsioon või anamneesis alkoholitarbimine.25 Hüpoteesime, et HCC kõrge riskiga tegurid võivad soodustada cfDNA hüpermetüleerimist, mis aitab seejärel kaasa HCC progresseerumisele, ja seega võib cfDNA mängida võtmerolli kõrge riskiga rühmade skriinimisel.Cai et al.võtavad kokku kõik ctDNA mutatsioonid ja pakuvad tugevat strateegiat kasvaja koormuse hindamiseks patsientidel.49 Selle strateegia abil saab tuvastada kasvaja teket keskmiselt 4,6 kuud enne pildi muutmist ja see on näidanud paremat diagnostilist jõudlust võrreldes seerumi biomarkeritega AFP, AFP-L3 ja PIVKA-II.cDNA testimise diagnostilist väärtust on näidatud siis, kui kujutise hindamine pole saadaval, seega on cDNA testimine väärtuslik varajase HCC diagnoosimisel kõrge riskiga rühmades.Hiljuti kasutasid teadlased NGS-tehnoloogiat, et analüüsida mitme muutujaga geneetilise variatsiooni näitajaid (sh 5-hüdroksümetüültsütosiin, 5'-motiiv, fragmentatsioon, nukleosoomijälg, HIFI) 3204 kliinilises proovis ja cfDNA-s.50 uuesti valideeritud HIFI mudelit kolme sõltumatu rongi-, testi- ja testikomplektiga näitasid stabiilset ja usaldusväärset eristamist HCC ja mitte-HCC populatsioonide vahel vastavalt 95,79% ja 95,42% tundlikkusega HCC-spetsiifilistes testimis- ja testikomplektides.Sugusid oli vastavalt 95,00% ja 97,83%.HIFI-meetodi diagnostiline väärtus on kõrgem kui AFP-l HCC eristamisel tsirroosist.Lisaks kasutatakse ctDNA-d ka kirurgilises ravis.Atsushi et al.määras CtDNA preoperatiivsed seerumitasemed HCC-ga patsientidel ja leidis, et kordumise määr ja ekstrahepaatiliste metastaaside määr cDNA-positiivses rühmas olid oluliselt kõrgemad kui cDNA-negatiivses rühmas ja cDNA tasemed olid märkimisväärselt korrelatsioonis.kasvaja progresseerumisega.51 Kuna ctDNA on väga tundlik biomarker, võib see ennustada HCC võimet tungida veresoontesse.Wang et al.viidi läbi 46 HCC-ga patsiendi kogu genoomi järjestamine ja mitme muutujaga analüüs näitas, et cDNA variandi alleeli sageduse läviväärtus mikroveresoontesse invasiooniks on 0,83%, tundlikkus 89,7% ja spetsiifilisus 80,0%.iseseisev riskitegur mikrovaskulaarse invasiooni tekkeks resekteeritavas HCC-s, mis viitab sellele, et cDNA võib aidata juhtida optimaalset ravi.Kokkuvõtteks võib öelda, et ctDNA on täielikult seotud HCC esinemise ja arenguga ning seda saab kasutada varajaseks sõeluuringuks, kirurgiliseks hindamiseks ja haiguse jälgimiseks.
CTC-d on pahaloomulised rakud, mis on saadud primaarsetest kasvajatest või metastaasidest, mis metastaaseeruvad vereringesse.Kasvajarakud sekreteerivad maatriksi metalloproteinaase (MMP), mis lagundavad basaalmembraani, võimaldades kasvajarakkudel otse verre ja lümfisoontesse siseneda.Kuid enamik CTC-sid elimineeritakse kiiresti anoikide, immuunrünnaku või nihkepinge tõttu.53 Epiteel-mesenhümaalne üleminek (EMT) võimaldab CTC-sid kergesti eraldada primaarsest kasvajakoest, tungida kapillaaridesse ja saavutada oluliselt paranenud elulemus, metastaasid, invasiivsus ja ravimiresistentsus.Uuringud on näidanud, et primaarsetes metastaatilistes kasvajates on erinevate kasvajarakkude vahel sügav heterogeensus.Seega võib CTC analüüs viia kasvajarakkude heterogeensuse igakülgse mõistmiseni.54
HCC-ga seotud CTC-de spetsiifiliste markerite hulka kuuluvad glüpikaan-3 (GPC3), asialoglükoproteiini retseptor (ASGPR), epiteelirakkude adhesioonimolekul (EpCAM) ja tüvirakkudega seotud markerid, nagu CD44, CD90, 55 ja rakkudevaheline adhesioonimolekul 1 (ICAM11).) .56 GPC3 marker on rakumembraaniga ankurdatud valk, mida kasutatakse kliiniliselt HCC patoloogiliseks analüüsiks ja iseloomustamiseks.57 GPC3 ekspressioon on tavalisem keskmise ja madala diferentseerumisega HCC kasvajarakkudes ning soodustab ekstrahepaatilist migratsiooni;lisaks viitab GPC3+ CTC-de olemasolu metastaatilisele HCC-le.58 ASGPR on transmembraanne valk, mida ekspresseeritakse ainult hepatotsüütide pinnal ja mida ekspresseeritakse tugevalt hästi diferentseerunud HCC-s.EpCAM on üks kõige sagedamini kasutatavaid membraaniga seotud valke CTC-de hõivamiseks.EpCAM on tuvastatud tüvirakkude omadustega HCC rakkude pinnamarkerina, 59 mis korreleerub HCC erinevate kliiniliste patoloogiliste tunnustega, nagu vaskulaarne invasioon, hinnatud AFP tase ja maksavähi kaugelearenenud staadium Barcelona haiglas (BCLC).60 CTC EMT fenotüüp on väga metastaatiline.54 EMT protsessi CTC-s soodustavad HCC metastaase.EMT-markerite, nagu vimentiin, twist, E-box tsink finger sidumine (ZEB) 1, ZEB2, tigu, nälkjas ja E-kadheriin, ekspressiooni on uuritud HCC patsientide maksast pärinevates CTC-des.58 Chengi välja töötatud CanPatrol™ süsteem [61] klassifitseeris CTC-d kolme fenotüübilisse alarühma, mis põhinesid valdavalt ekspresseeritud markeritel: epiteeli fenotüüp (EpCAM, CK8/18/19), mesenhümaalne fenotüüp (vimentiin, keritud) ja segatud fenotüübid.176 patsiendil oli kogu CTC parem kui AFP, eristades HCC-d healoomulisest maksahaigusest.Kogu CTC, AFP ja kogu CTC ja AFP AUC väärtused olid 0,774 (95% CI, 0,704–0,834), 0,669 (95% CI, 0,587–0,750) ja 0,821 (95% CI, 0,78866–0. ).), vastavalt.EMT-l põhinev CTC klassifikatsioon võib ennustada HCC diagnoosi, varajast kordumist, metastaase ja lühemat üldist aega.
Praegu hõlmavad CSC-de tuvastamise meetodid füüsikalisi ja bioloogilisi meetodeid.Füüsikalised meetodid, mida sageli nimetatakse biofüüsikalistel omadustel põhinevaks rikastamiseks, sõltuvad peamiselt CSC füüsikalistest omadustest, nagu suurus, tihedus, laeng, liikuvus ja deformeeritavus.Sõltuvalt füüsikalistest omadustest on erinevaid meetodeid, nagu filtreerimispõhised süsteemid, dielektroforees jne. Viimane, tuntud ka kui immunoafiinsuspõhine rikastamine, põhineb peamiselt antigeeni-antikeha sidumisel, kuna meetod kasutab kasvajaspetsiifiliste biomarkerite vastaseid antikehi. nagu EpCAM, ASGPR, inimese epidermaalse kasvufaktori retseptor 2 (HER2), eesnäärmespetsiifiline antigeen (PSA), inimese pantsütokeratiin (P-CK) ja karbamoüülfosfaadi süntaas 1 (CPS1).62 Teine tüüp, mida nimetatakse rikastamiseta meetodiks, kasutab voolutsütomeetriat, et eristada CTC-d leukotsüütidest kõrgema tuuma ja tsütoplasma suhte ja suuruse alusel.Praegu on ainus FDA poolt heaks kiidetud test CTC-de tuvastamiseks Cell-Search™ süsteem, mis kasutab EpCAM-i rakupinna markerit. Kombineeritud markeritel põhinev CTC tuvastamine võib aga suurendada positiivsuse määra.54 ASGPR ja CPS1 vastaste antikehade segu saavutas HCC-ga patsientidel CTC tuvastamise määra 91%.63 Zhang jt kasutasid ASGPR-i vastaste antikehadega CTC-kiipi, P. -CK ja CPS1 ning eristas HCC-ga patsiente healoomulise maksahaiguse või mitte-HCC-vähiga patsientidest sagedusega 100%.64 Wangi uuring tuvastas EpCAM+ CTC-d 60%-l 42-st HCC-ga patsiendist ja leidis olulisi korrelatsioone mõlema positiivsuse vahel. määr ja TNM staadiumiga CTC-de arv.65 Guo jt leidsid, et CTC-st tuletatud PCR skoor oli kõrgem 125/171 (73%) patsiendil, kelle AFP tase oli <20 ng/ml, tundlikkusega 72,5% ja spetsiifilisus 95,0%, võrreldes 57,0% ja 90,0% AFP-ga piirväärtusel 20 ng/ml.66 AFP ja CTC-de kombinatsioon võib parandada HCC tuvastamist.45 Arvatakse, et CTC-del on rühmade varases sõeluuringus AFP-ga võrreldes eelis. kõrge riskiga HCC jaoks. Kombineeritud markeritel põhinev CTC tuvastamine võib aga suurendada positiivsuse määra.54 ASGPR ja CPS1 vastaste antikehade segu saavutas HCC-ga patsientidel CTC tuvastamise määra 91%.63 Zhang jt kasutasid ASGPR-i vastaste antikehadega CTC-kiipi, P. -CK ja CPS1 ning eristas HCC-ga patsiente healoomulise maksahaiguse või mitte-HCC-vähiga patsientidest sagedusega 100%.64 Wangi uuring tuvastas EpCAM+ CTC-d 60%-l 42-st HCC-ga patsiendist ja leidis olulisi korrelatsioone mõlema positiivsuse vahel. määr ja TNM staadiumiga CTC-de arv.65 Guo jt leidsid, et CTC-st tuletatud PCR skoor oli kõrgem 125/171 (73%) patsiendil, kelle AFP tase oli <20 ng/ml, tundlikkusega 72,5% ja spetsiifilisus 95,0%, võrreldes 57,0% ja 90,0% AFP-ga piirväärtusel 20 ng/ml.66 AFP ja CTC-de kombinatsioon võib parandada HCC tuvastamist.45 Arvatakse, et CTC-del on rühmade varases sõeluuringus AFP-ga võrreldes eelis. kõrge HCC riskiga.Markeripõhine kombineeritud CTC tuvastamine võib aga suurendada positiivsete tulemuste protsenti.54 Anti-ASGPR ja CPS1 antikehade segu saavutas HCC-ga patsientidel CTC tuvastamise määra 91%.63 Zhang et al.kasutas ASGPR, P-CK ja CPS1 vastaste antikehadega CTC-kiipi ning eristas 100% ka HCC-ga patsiente healoomulise maksahaigusega või mitte-HCC-ga patsientidest.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге групп. TNM-i staadiumiga CTC-de sagedus ja arv.65 Guo jt leidsid, et CTC-dest tuletatud PCR oli kõrgem 125/171 (73%) patsiendil, kelle AFP tase oli <20 ng/ml, tundlikkusega 72,5% ja spetsiifilisusega 95,0% võrreldes 57,0% ja 90,0% AFP-ga piirtasemel 20 ng/ml.66 AFP ja CTC-de kombinatsioon võib parandada HCC tuvastamist.45 CTC-d peetakse varajases sõeluuringus AFP-ga võrreldes eeliseks. rühmad.kõrge HCC riskiga.Siiski võib CTC-de markeripõhine kombineeritud tuvastamine suurendada positiivsete tulemuste protsenti.54 Anti-ASGPR ja CPS1 antikehade segu saavutas HCC-ga patsientidel CTC tuvastamise määra 91%.63 Zhang et al.kasutas ASGPR, P-CK ja CPS1 vastaste antikehadega CTC kiipe ning eristas HCC-ga patsiente healoomulisest maksahaigusest ja mitte-HCC-ga patsiente 100%.64 Wangi uuring tuvastas 60% EpCAM+ CTC-dest 42 HCC-ga patsiendil ja leidis olulise korrelatsiooni esinemissageduse ja CTC-de arvu vahel TNM-i staadiumis. 65 Guo 等 ， ， 在 AFP 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 ， ， ， CTC 衍生 的 的 PCR 评分 ， ， ， ， ， ， ， ， ， 72,5%， 特异性 特异性 特异性 为 95,0%， ， ， 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 ， ， ， ， ， ，值为20 ng/mL 时的特异性为57,0% 和90,0%. 65 Guo 等 发现 发现 在 在 水平 水平 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 ， ， ， CTC 衍生 PCR 评分 ， ， 敏感性 敏感性 为 为 为 为 为 为 72,5%， ， 95,0%， AFP 在 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值 截止值.65 Guo et al.обнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП на уровне отсечки Специфичность составляла 20 нг/мл. leidis, et 125/171 (73%) patsiendil, kelle AFP tase oli alla 20 ng/ml, tõusid CTC-st tuletatud PCR väärtused tundlikkusega 72,5% ja spetsiifilisusega 95,0%, samas kui AFP oli spetsiifilisuse piirväärtuses. oli 20 ng/ml.ml oli 57,0% ja 90,0%.66 ORP ja CTC kombinatsioon parandab HCC tuvastamist.Arvatakse, et kõrge riskiga HCC populatsioonide varases sõeluuringus on 45 CTC-d paremad kui AFP.Seega tuleks CTC-positiivsete ja kõrge riskiga HCC rühmade puhul CTC testimine regulaarselt kombineerida ultraheli ja AFP tuvastamisega.Siiski peetakse CTC-sid olulisteks kasvaja metastaaside ja kordumise ennustajateks ning CTC-de tuvastamist ei soovitata iseseisvalt diagnostikavahendina.Seetõttu võib CTC olla parem ennustav biomarker kui teised praegu kasutatavad markerid. Zhou jt leidsid, et kõrgenenud EpCAM+ CTC-de ja regulatoorsete T-rakkude arvuga patsientidel oli suurem risk HCC kordumise tekkeks kui neil, kellel oli vähe CTC-sid, retsidiivide suhtarv 66,7% vs 10,3% (P < 0,001).67 Sarnasest uuringust teatasid Zhong jt.68 Lisaks leidis Qi, et 112-st HCC-ga patsiendist (90,81%), sealhulgas varajases staadiumis haigusega patsiendid, olid CTC suhtes positiivsed ja väga väikesed HCC sõlmed avastati pärast 3. kuni 5 kuud jälgimisperioodi. Zhou jt leidsid, et kõrgenenud EpCAM+ CTC-de ja regulatoorsete T-rakkude arvuga patsientidel oli suurem risk HCC retsidiivi tekkeks kui neil, kellel oli vähe CTC-sid, retsidiivide suhtarv 66,7% vs 10,3% (P < 0,001).67 A sarnasest uuringust teatasid Zhong jt.68 Lisaks avastas Qi, et 112-st HCC-ga patsiendist (90,81%), sealhulgas varajases staadiumis haigusega patsiendist 101, olid CTC suhtes positiivsed ja väga väikesed HCC sõlmed avastati pärast 3. 5 kuud jälgimist. Чжоу и др.обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Zhou jt leidsid, et kõrgenenud EpCAM+ CTC ja regulatoorsete T-rakkudega patsientidel oli HCC kordumise risk suurem kui madala CTC-ga patsientidel, kordumise määr oli 66,7% vs 10,3% (P <0,001)67.Sarnase uuringu viisid läbi Zhong et al.68. Lisaks leidis Qi, et 101-l 112-st HCC-ga patsiendist (90,81%), sealhulgas varajases staadiumis haigusega patsiendil, olid CTC-d ja et väga väikesed HCC-sõlmed avastati pärast 3–5-kuulist jälgimist. Zhou 等 ， ， 与 ctc 数量 较 的 患者 相比 ， ， epcam+ ctc 和 调节性 t 细胞 细胞 数量 升高 患者 患者 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 复发 复发 的 高 ， ， ， ， ， 复发率 复发率 分别 分别 66,7% 和 10,3% (p <0,001)。 Zhou 等 人 发现 与 与 ctc 数量 少 的 患者 相比 ， epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 发生 hcc 复发 风险 更 ， 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 10.3% ( p <0,001)……………………………………… Чжоу и др.обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). Zhou et al.leidsid, et kõrgenenud EpCAM+ CTC ja regulatoorsete T-rakkudega patsientidel oli suurem risk HCC kordumise tekkeks võrreldes patsientidega, kellel oli vähem CTC-sid, kordumise sagedusega vastavalt 66,7% ja 10,3% (P < 0,001).Sarnasest uuringust teatasid Zhong et al.68 Lisaks leidis Qi, et 112 HCC patsiendist 101-l (90,81%), sealhulgas varajases staadiumis haigusega patsiendid, olid positiivsed CTC tulemused ja leidis pärast 3 visiiti väga väikesed HCC sõlmed.Vaatlus kuni 5 kuud.Samuti leidsid nad CTC-d 12 kroonilise HBV-nakkusega patsiendil ja väikesed HCC kasvajad 5 kuu jooksul kahel CTC-positiivsel patsiendil.69 Seega saab CTC-sid kasutada HCC ennustamiseks, 70 kuid neid saab kasutada rutiinsemalt ennustavate biomarkeritena.
Sarnaselt cfDNA-ga vabaneb cfRNA vereringesse erinevate süsteemide kaudu.Need perifeerses veres olevad molekulid esindavad päritolu vähikudet.Võrreldes mitteinvasiivsete meetoditega tuvastatud markeritega on cfRNA-d dünaamilisemalt reguleeritud, koespetsiifilisemad ja rakuvälises keskkonnas rohkesti.71 miRNA (miRNA) tähtsust ja diagnostilist väärtust HCC-s on kirjeldatud paljudes uuringutes.miRNA-d on endogeensed mittekodeerivad RNA-d (ncRNA-d), mis reguleerivad erinevaid molekulaarbioloogilisi aktiivsusi, pärssides sihtmärk-messenger-RNA-de (mRNA-de) translatsiooni.miRNA-d asuvad apoptootilistes kehades, mis on kapseldatud eksosoomidesse, kuid nad võivad stabiilselt seonduda ka perifeerses veres seerumi valkude ja lipiididega ning neid saab kasutada HCC hindamiseks.MikroRNA-d on seotud maksa regenereerimise, lipiidide metabolismi, apoptoosi, põletiku ja HCC arenguga.72 Onkogeensed miRNA-d, nagu miR-21, miR-155 ja miR-221, on HCC-s hästi tuntud.Eelkõige mängib miR-21 võtmerolli kollageeni sünteesis rakuvälises maatriksis ja fibroosis ning soodustab hepatokartsinogeneesi, aktiveerides vereloome tüvirakke.72,73 HCC kasvaja supressor-miRNA-d hõlmavad miRNA-122, miRNA-29, Let-7 perekonda ja miRNA-15 perekonda.Let-7 perekond koosneb paljudest kasvaja supressor-miRNA-dest, mis on suunatud RAS-i perekonda.MiR-15 perekonda kuuluvad miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 ja miR-497, millel on teatud mRNA-de jaoks komplementaarsed järjestused.Lisaks on HCC varase skriinimise jaoks olulised ka pikad mittekodeerivad RNA-d (lncRNA-d) ja ringikujulised RNA-d (cirRNA-d).LncRNA-d esindavad kõige laiemat ncRNA-de klassi, sealhulgas mRNA-sarnaseid ncRNA-sid, ja on seotud paljude inimeste haiguste patogeneesiga.LncRNA-d mängivad reguleerivat rolli maksa mikrokeskkonnas ja kroonilises maksahaiguses.74 CircRNA-d on ka ncRNA-de klass, millel on geeniekspressiooni reguleerimisel mitu funktsiooni.Hiljuti on tsirkRNA-sid peetud HCC diagnostikavahenditeks.
Ringleval vabal RNA-l on märkimisväärne stabiilsus, sealhulgas vastupidavus temperatuurile, pH-le ja RNaasile, mis muudab fnRNA eraldamise perifeersest verest tavaliste RNA puhastusmeetodite abil vähem tüütuks.Kõige sagedamini kasutatavad meetodid hõlmavad NGS-i, mikrokiibi ja RT-qPCR-i.NGS võimaldab mikroRNA-sid mõõta kogu genoomis.See meetod on aga kallis ja analüüs ei ole standardiseeritud.Seevastu RT-qPCR on odav, võimendab kiiresti nukleiinhappeid ja pakub palju eeliseid, nagu suurem tundlikkus, suurem täpsus, laiem dünaamiline ulatus ja vähem proovide vajadus.Mikrokiibid on teine ​​​​miRNA tuvastamise meetod, mis põhineb sihtmärk-miRNA-de tundlikul ja spetsiifilisel hübridisatsioonil komplementaarsete DNA-sondidega, 75 kuid mikrokiibi andmete analüüs on aeganõudev.
On teatatud, et tsirkuleerivad miR-122 ja Let-7 võivad olla potentsiaalselt kasulikud varases staadiumis HCC diagnoosimisel kõrge riskiga rühmades, markerite diagnoosimisel HBV-ga seotud pahaloomuliste sõlmede ja varajases staadiumis HCC-ga patsientidel.76 Cai et al.leidis, et Let-7 perekonna liikmetel (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 ja miR-199a/b) on oht krooniliseks haigestuda. HCC hepatiidiga patsientidel.Let-7 perekond võib olla tõhus surrogaat-biomarker HCC tekke ennustamisel kroonilise C-hepatiidiga seotud kõrge riskiga rühmades. 77 miR-122 on kõrge diagnostilise täpsusega varajase HCC tuvastamisel maksatsirroosiga patsientidel.78 Seerumi ringlevat MiR-107 on hinnatud ka HCC varases staadiumis 79 ja see on näidanud head potentsiaali kõrge riskiga populatsioonides.Zhou jt teatasid, et miRNA-de paneel (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a ja miR-801) võib eristada HCC-d kroonilisest B-hepatiidist (CHB) ja tsirroosist. tundlikkus oli 79,1% ja 75% ning spetsiifilisus vastavalt 76,4% ja 91,1%.80 HBV-ga seotud HCC-s leidsime, et miR150 tase oli oluliselt langenud võrreldes krooniliste HBV-ga patsientidel, kellel ei olnud HCC-d (tundlikkus 79,1%, spetsiifilisus 76,5%).-224 oli HCC-s kõrgem võrreldes tervete kontrollidega ja alarühmade analüüsid näitasid kõrgemat taset HBV-ga seotud HCC-ga patsientidel.B-hepatiidiga seotud tsirroosi ja HCC-ga patsiendid tuvastasid siRNA klassifikaatori, mis sisaldab seitset erinevalt ekspresseeritud siRNA-d, mis suudavad tuvastada HCC erinevates kontrollides;AUC vahemik varajasel sõeluuringul on parem kui AFP vabatahtlikel.Nad leidsid, et neli miRNA-d (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p ja miR-365a-3p) võivad eristada HCC-ga patsiente HCC-ta patsientidest.Viit üleekspresseerivat miRNA-d (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p ja miR-148a-3p) peetakse potentsiaalseteks HBV infektsioonideks HCC, tsirroosi ja CHB biomarkerites, eriti miR-34a-5p võivad olla maksatsirroosi biomarkerid85 ja potentsiaalsed biomarkerid HCC varajaseks skriinimiseks kõrge riskiga populatsioonides.HCC-s enim uuritud lncRNA on maksavähi (HULC) korral väga aktiveeritud.Teised uuringud on näidanud, et HCC-ga patsientidel ringlevat HULC-d saab kasutada diagnostilise markerina, kuna see lncRNA on HCC-ga patsientidel võrreldes tervete inimestega tugevalt ülesreguleeritud.71,86 Teiste lnRNA-de hulgas peetakse LINC00152 parimaks diagnostiliseks lncRNA-ks selle kõrge AUC, tundlikkuse ja spetsiifilisuse tõttu.86 Ühes uuringus suurenes LINC00152 perifeerse vere ekspressioon järk-järgult normaalsetest tervetest kontrollidest CHB ja tsirroosiga patsientidele ning lõpuks oli kõrgeim HCC korral.Uuringud circSMARCA5 ekspressiooni kohta HCC-ga patsientide plasmas on näidanud HCC ekspressiooni progresseeruvat langust alates hepatiidist kuni tsirroosi ja vähieelsete kahjustusteni.87 ROC-kõverate analüüs kinnitas nende tsirkRNA-de potentsiaali hepatiidi või maksatsirroosiga patsientide eristamisel HCC-ga patsientidest, eriti nendest, kelle AFP tase on alla 200 ng/ml.Lisaks analüüsis Zhu HBV-ga seotud HCC-ga patsientide plasmaproovides 13 617 tsüklilist RNA-d ja kinnitas, et 6 tsüklilist RNA-d ekspresseeriti HCC ja HBV-ga seotud tsirroosi korral erinevalt, mis viitab sellele, et cRNA-d võivad olla kasulikud.markerid kõrge riskiga rühmade, näiteks maksahaiguste ja skleroosiga patsientide varajaseks sõeluuringuks.88
Eksosoomid on membraani vesiikulid läbimõõduga 40–160 nm;mitu intratsellulaarset vesiikulit ühinevad rakumembraaniga ja vabanevad rakuvälisesse maatriksisse.Need sisaldavad palju aktiivseid komponente, sealhulgas lipiide, valke, RNA-d ja DNA-d, ning mängivad võtmerolli rakkude, nii HCC kui ka mitte-HCC rakkude vahelises suhtluses.89,90 eksosoomid reguleerivad HCC progresseerumist, aktiveerides hepatotsüütide fibroblaste ja tähtrakke, immuunrakke, normaalseid hepatotsüüte ja HCC rakke.91 Kasvaja mikrokeskkonnas toodavad kasvajarakud suurel hulgal eksosoome, mis kanduvad vähirakkudest ebaküpsetesse rakkudesse, mis omakorda osalevad onkogeneesis, lagunemises ja raku signaaliülekandes.92 Uuringud on näidanud, et eksosoomid võivad patoloogiliste protsesside käigus kanda onkogeene normaalsetesse rakkudesse, mis võib olla üks kasvaja invasiooni ja metastaaside tekke mehhanisme.93 Eksosoomide roll vähi progresseerumisel võib olla dünaamiline ja vähitüübile spetsiifiline. 89 Eksosoomid võivad olla sisestatud külgnevate või kaugemate rakkude poolt, et reguleerida mitut sihtgeeni retsipientrakkudes, mis võivad olla seotud rakkudevahelise suhtluse ioonidega ja raku mikrokeskkonna interaktsioonidega. vahendada raku signaaliülekannet ja ainevahetust.94 Eksosoomi lastimolekulide omadused ja dünaamilised muutused peegeldavad otseselt vanemlike kasvajarakkude omadusi ja dünaamilisi muutusi,95 mis on ühtlasi aluseks eksosoomide kasutamisele vähi diagnoosimisel ja prognoosimisel, aga ka individuaalse ravivastuse ennustamisel vähivastasele ravile. ..96
Traditsioonilised laboratoorsed meetodid eksosoomide eraldamiseks ja analüüsimiseks on keerulised, mitmeetapilised ja aeganõudvad, sealhulgas ultratsentrifuugimine, filtreerimine, suuruskromatograafia, immunoafiinsuspuhastus, Western blot, ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs (ELISA), PCR ja vooluanalüüs.Eksosoomide kiireks ja mugavaks isoleerimiseks in situ arendatakse laialdaselt mikro-/nanotehnoloogiat kasutavaid miniatuurseid süsteeme ja labori-kiibil platvorme.Nanoosakeste jälgimise analüüs (NTA) on laialdaselt kasutatav meetod eksosoomide suuruse ja kontsentratsiooni iseloomustamiseks, sealhulgas sellised meetodid nagu magnetilised nanoosakesed ja polühüdroksüalkanoaadid.Mikrofluidilised ja elektrokeemilised meetodid võivad samuti kiiresti tuvastada suure saagisega eksosoome.
Eksosomaalsed valgud on HCC diagnoosimisel olulised markerid.Arbelaizi uuringus oli 98 RasGAP SH3 siduva valgu (G3BP) ja polümeerse immunoglobuliini retseptori (PIGR) tase HCC-st saadud eksosoomides oluliselt kõrgem ning kahe valgu oletatav kombineeritud efektiivsus oli parem kui AFP oma.Raua ülekoormus on HCC arengut soodustav oluline tegur.Tseng teatas, et heptsidiin võib mängida võtmerolli resistentsuses HCC suhtes.99 HCC patsientide seerumitest saadud eksosoomidel oli oluliselt suurem heptsidiini mRNA variantide koopiate arv kui nende tervetel kolleegidel, mis viitab sellele, et heptsidiin võib olla HCC uudne diagnostiline biomarker.14-3-3ζ valk eksosoomides, mida toodab 100 HCC, võib vähendada T-rakkude aktivatsiooni, proliferatsiooni ja diferentseerumist ning indutseerida T-rakkude transformatsiooni regulatoorseteks T-rakkudeks, mille tulemuseks on T-rakkude ammendumine.101 Seda toetavad mitmed uuringud, mis uurivad kasvaja kõrvalehoidmist immuunseirest, 102 mis võivad kaasa aidata HCC tuumorigeneesile.
Lisaks ecRNA esinemisele plasmas või seerumis saab RNA-ga rikastatud eksosoome kasutada mitteinvasiivseks reaalajas staadiumiks kasvaja varases sõeluuringus ning kasvaja arengu ja ravivastuse määramiseks.Eksosomaalse miRNA-21 tase vereseerumis oli HCC rühmas 2,21 korda kõrgem kui CHB rühmas ja HCC rühmas 5,57 korda kõrgem kui tervel populatsioonil.Wangi uuringus suurendasid eksosoomid oluliselt HCC-d võrreldes tsirroosiga patsientidega, kelle AUC väärtused olid 0,83 (95% CI 0,74–0,93) ja 0,94 (95% CI 0,88–1,00).104 Saadud andmed selgitasid spetsiifiliste eksosomaalsete lastimolekulide osalust onkogeneesi ja HCC progresseerumise reguleerimises.105 MiR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 ja miR-26a ekspressioon seerumis on ühtlane.ja metastaasid ning miR21 tase oli HCC patsientidel palju kõrgem kui tervetel kontrollidel ja ka CHB patsientidel.102 LncRNA-l oli HCC puhul potentsiaalne diagnostiline väärtus.Uuringud on näidanud, et HCC-ga patsientide seerumitest saadud eksosoomidel on kasvufaktor-β transformeerimisel aktiveeritud LINC00161, LINC000635 ja lncRNA tase oluliselt kõrgem kui HCC-ta patsientidel ning need lncRNA-d on tugevalt seotud TNM-i staadiumi ja kasvaja mahuga.110 Conigliaro et al.Leiti, et CD90+ eksosoomid ekspresseerivad kõrgel tasemel lncRNAH19, mis suurendas oluliselt veresoonte endoteeli kasvufaktori (VEGF) vabanemist ja VEGF-R1 retseptori tootmist, stimuleerides seeläbi angiogeneesi.93 CircRNA-d on teist tüüpi eksosomaalsed ncRNA-d – neid ekspresseeritakse liikide lõikes madalamal, kuid stabiilsel tasemel, tsirRNA-d näitavad ka spetsiifilisust rakutüübi, koetüübi, arengufaasi ja regulatoorse aktiivsuse suhtes.111 tsirkRNA-d on varajase ja minimaalselt invasiivse vähi diagnostilised biomarkerid.112 Hiljutised kliinilised uuringud on näidanud, et üksikute miRNA-de spetsiifilisus HCC ennustamisel ei ole ideaalne.Seetõttu võib kompleksne tuvastamine mitme analüüsi abil (nt miR-122 ja miR-48a kombinatsioonis AFP-ga) parandada varase HCC tuvastamist ja HCC eristamist tsirroosist.100
CHB ja maksatsirroosiga patsiendid on HCC tekkeks kõige levinum kõrge riskiga rühm.Kõrge riskiga rühmade puhul tuleks pärast püsiva viroloogilise vastuse saavutamist välja töötada HCC riskil põhinev kulutõhus seirestrateegia ning varajane sõeluuring on võti HCC diagnoosimise ja ravi parandamiseks kõrge kulutasuvuse suhtega2. ..Vähi varases sõeluuringu meetoditel on palju piiranguid: enamiku vähiliikide jaoks ei ole välja töötatud tõhusaid varajasi sõeluuringumeetodeid ja ravisoostumus on tavaliselt madal.Võrreldes traditsiooniliste varajaste sõelumismeetoditega on vedelbiopsiatehnoloogial ilmsed eelised: proovide võtmise lihtsus, panraci tuvastamine, hea proovi reprodutseeritavus ja tõhus reaktsioon kasvaja heterogeensusele.Arvestades vedela biopsiaga seotud meetodite kulutõhusust, ei ole nende kasutamist HCC sõeluuringus regulaarselt testitud.Vaatamata edusammudele täpses tuvastamises molekulaarsel tasemel, on vedeliku biopsia kulukas HCC tuvastamiseks sihtpatsientidel, piirates selle laialdast kasutamist võrreldes spetsiifiliste kuvamisprotseduuridega, nagu ultraheli ja magnetresonantstomograafia.113 114 Eelmine uuring näitas aga, et vedeliku biopsia näitas olulist kasu kvaliteediga kohandatud eluaastate (QALY) osas.115 Samuti on näidatud vedela biopsia kasulikkust mao ja ninaneelu varajases kartsinoomis.116 117 Praegune seisukoht on, et vedel biopsia võib täiendada seerumi biomarkereid ja radioloogilist sõeluuringut kasvajate avastamisel ja diagnoosimisel.117 118
Praeguse kirjanduse andmetel on vedeliku biopsia tehnoloogia näidanud maksavähi kõrge riskiga rühmade varajases sõeluuringus oluliselt suuremat tundlikkust ja spetsiifilisust.Sõltumata vedeliku biopsia tüübist võib see eristada HCC-d kõrge riskiga isikutest, kellel puudub HCC, mis viitab varajase sõeluuringu tähtsusele, kuna erinevused kõrge riskiga ja tervete inimeste vahel on ilmsed.ctDNA-l on lühike poolväärtusaeg ja seda saab kasutada HCC tuvastamiseks, nii et kõik kasvajast pärineva cDNA muutused võivad anda reaalajas konkreetseid tõendeid kasvaja progresseerumise kohta, eriti väikeste kasvajate puhul.Kõrge ctDNA tase näitab vähi arengut ja levikut ning on progresseerumise ja kordumise varajane näitaja.Lisaks saavad patsiendid ctDNA tulemuste põhjal saada individuaalset ravi ja järelkontrolli.119 Spetsiifilised metüülimiskohad võivad olla parem marker kui AFP HCC ja tsirrootiliste sõlmede varajaseks tuvastamiseks.HCC resekteeritavatel juhtudel viitab kõrge cDNA tase mikrovaskulaarsele invasioonile ning operatsioonijärgsele retsidiivile ja metastaasidele.Muutused koopiate arvus on seotud HCC-ga patsientide ellujäämisega.Võib eeldada, et cDNA hindamine võib olla seotud HCC üldise raviga ja cDNA võib olla terapeutilise modulatsiooni tõhus indikaator.CtDNA spetsiifilistel geneetilistel mutatsioonidel põhinevad markerid on kliinilistes juhistes kasutusele võetud, et ennustada efektiivsust ja jälgida ravimiresistentsust.ctDNA testimine võib olla varajase sõeluuringu jaoks kõige kasulikum vedel biopsia.CTC-d mängivad võtmerolli ka kõrge riskiga HCC rühmade varases sõeluuringus.Erinevad HCC-ga seotud CTC-de markerid on HCC tekkes, arengus ja kordumises eriti olulised.Membraani vesiikulitena osalevad eksosoomid rakkudevahelises suhtluses, eriti HCC rakkudes.Tsirkuleerivad mikroRNA-d on veres stabiilsed ja võivad seega olla kasulikumad HCC varases sõeluuringus.Järk-järgult avastati eksosomaalsed valgud ja RNA-rikkad eksosoomid ning kinnitati nende ennustav efektiivsus HCC suhtes.Huvitav on see, et HCC erinevad etioloogiad võivad olla seotud ka erinevate mutatsioonidega, nii et saame HCC erinevate etioloogiate põhjal varaseks sõelumiseks valida erinevaid biomarkereid.120
Kuid praegused vedeliku biopsia meetodid on stabiilsuse seisukohast küsitavad ja ei suuda iseseisvalt läbi viia HCC varajast sõeluuringut või jälgimist, kuid võivad siiski täiendada individuaalset sõeluuringut ja diagnoosimist.121 Vedela biopsia vormina on ctDNA, CTC, cfRNA ja eksosoomiga seotud AFP või PIVKA-II tuvastamisel ja pildistamisel paljutõotavad rakendused HCC varajases diagnoosimises ja prognoosimises.Täpne ctDNA verre vabanemise mehhanism tuleb aga veel välja selgitada.CtDNA põhiliste bioloogiliste omaduste paljastamine võib hõlbustada selle kasutamist markerina.CtDNA väike kogus vereringes ja ranged proovide käitlemise nõuded on väljakutseks cDNA tuvastamise kliinilisel rakendamisel HCC-s.Lisaks ei ole geneetilistel mutatsioonidel spetsiifilisi tunnuseid, mis võimaldavad kantserogeene täpselt tuvastada.Kuna normaalsetes kudedes esineb ka mitmeid geneetilisi ja somaatilisi variante, võivad vedelikubiopsiaga tuvastatud geneetilised mutatsioonid olla HCC varases sõeluuringus piiratud kasutusega.122 Täpselt määratletud kasulike geenide sihtmärkide ja biomarkerite piirangud, mis aitavad eristada cDNA-d mittekasvaja DNA-st, on cDNA kasutamise kõige olulisemad probleemid.tundlike ja spetsiifiliste markerite kasulikkuse puudumine CTC-de tuvastamiseks.Leiti ainult metastaatilise potentsiaaliga elujõulised rakud ja CSC-ga rikastatud markerite optimaalne kombinatsioon oli ebaselge.CTC-de eraldamine kultuuri jaoks ja nende mutatsiooniprofiilide hindamine on samuti keeruline ülesanne.Eksosoomide tuvastamise, eraldamise ja puhastamisega seotud probleemide tõttu on konkreetne molekulaarne mehhanism endiselt ebaselge ning varasemad uuringud eksosoomide ja HCC mehhanismi kohta ei ole olnud põhjalikud ning miRNA-de, lncRNA-de ja valkude eksosoomideks sorteerimine. , ja pole selge, kas eksosoomide omastamine on spetsiifilist tüüpi protsess.Eksosoomide kasutamine HCC diagnoosimiseks ja raviks on veel prekliinilises staadiumis.Vedelate biopsiaprotseduuride, nagu vere kogumiseks kasutatavate katsutite tüüp, veremaht, proovide säilitamine ja tuvastamine, isoleerimine ja rikastamine, standardimise puudumine võib välistada nende kasutamise tavapärases kliinilises praktikas meditsiinikeskuste praktikate erinevuste tõttu.Vedelbiopsia tõhusust HCC varases sõeluuringus, diagnoosimisel, efektiivsuse hindamisel ja prognoosimisel tuleb veel uurida, eriti kõrge riskiga rühmade puhul.Vedelbiopsiatehnoloogial on suur potentsiaal ja seda lähitulevikus oodatakse laialdaselt ka maksavähi kliinilises praktikas.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL et al.Ülemaailmne vähistatistika 2020: GLOBOCAN hindab 36 vähitüübi esinemissagedust ja suremust 185 riigis.CA Cancer J Clin.2021; 71 (3): 209–249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Rahvusliku tervisekomisjoni peakorter.Primaarse maksavähi diagnoosimise ja ravi kriteeriumid (2022. aasta väljaanne) [J].Journal of Clinical Liver Diseases, 2022, 38(2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z jt.Hepatotsellulaarse kartsinoomi diagnoosimise ja ravi juhised (2019. aasta väljaanne).Maksavähk.2020;9(6):682–720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K jt.Hepatotsellulaarse kartsinoomi kliinilise praktika juhised: Jaapani maksahaiguste selts, 2017 (JSH-HCC 4. juhised), 2019. aasta värskendus.Maksahaiguste reservuaar.2019;49(10):1109–1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA Vedelbiopsia kroonilise maksahaiguse korral.Ann Hepato.2021;20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.Vedel rinnavähi biopsia: keskendunud ülevaade.Arch Pathol Lab Med.2021;145(6):678–686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Hepatotsellulaarse kartsinoomi seire: praegused parimad tavad ja tulevikusuunad.Gastroenteroloogia.2019;157(1):54–64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. European Research Association L, European Organization R, C Therapeutics.Kliinilised juhised EASL-EORTC: hepatotsellulaarse kartsinoomi ravi.J Hepariin.2012;56(4):908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK et al.AFP ja HCCR-1 kombineeritud analüüs kasulike seroloogiliste markeritena väikese hepatotsellulaarse kartsinoomi korral: tulevane kohordiuuring.Dis Mark.2012;32(4):265–271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S et al.Plasma mikroRNA-125b diferentsiaalne ekspressioon B-hepatiidi viirusega seotud maksahaiguses ja B-hepatiidi viiruse põhjustatud hepatotsellulaarse kartsinoomi diagnostiline potentsiaal.Maksahaiguste reservuaar.2017;47(4):312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. jt.Alfa-fetoproteiini bioloogia ja tähtsus hepatotsellulaarse kartsinoomi korral.Maksa int.2019;39(12):2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N jt.Kliinilised juhised hepatotsellulaarse kartsinoomi raviks Aasia ja Vaikse ookeani piirkonnas: 2017. aasta värskendus.Rahvusvaheline Maksahaiguste Organisatsioon.2017;11(4):317–370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei jt.Seerumi PIVKA-II diagnostiline väärtus üksi või kombinatsioonis AFP-ga hepatotsellulaarse kartsinoomiga Hiina patsientidel.Dis Mark.2021; 2021: 8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. et al.Mitte-väikerakk-kopsuvähi mitte-plasma humoraalse vedeliku biopsia: kasvajale lähemale!kamber.2020;9(11).doi: 10,3390/cells9112486
15. Mader S, Pantel K. Vedelik biopsia: hetkeseis ja tulevikuväljavaated.Ravi Oncol Res.2017;40(7-8):404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P jt.Vedelikpõhine vähibiopsia: multimodaalne diagnostikavahend kliinilises onkoloogias.Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Nukleiinhapped inimese plasmas.CR Seances Soc Biol Fil.1948; 142 (3-4): 241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM et al.Tsirkuleeriva kasvaja DNA täpsem tuvastamine fragmendi suuruse analüüsi abil.Teadus tõlgib meditsiini.2018;10:466.doi: 10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.Tsirkuleeriva kasvaja DNA fragmendi pikkus.PLOS geenid.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. Ringlev kasvaja DNA: paljulubav biomarker vedelikupõhises vähibiopsias.sihtkasvaja.2016;7(30):48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ et al.Tsirkuleeriva kasvaja DNA tuvastamine inimese pahaloomuliste kasvajate varases ja hilises staadiumis.Teadus tõlgib meditsiini.2014;6(224):224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. Vedelbiopsia tahke vähi mutatsiooni ennustavaks analüüsiks: patoloogi vaatenurk.J Biotehnoloogia.2019; 297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.Kasvaja varajane avastamine tsirkuleeriva plasma DNA sõeluuringu abil: hüpe või lootus?Belgia kliiniline seadus.2020;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. Hepatiidiviiruse ja vananemise mõju DNA metüülimisele inimese hepatokartsinogeneesis.Histopatoloogia.2010;25(5):647–654.doi: 10,14670/HH-25,647